?近年來，CRISPR/Cas技術(shù)飛速發(fā)展，基于該技術(shù)發(fā)展的分子檢測(cè)方法具有快速、靈敏、特異、廉價(jià)等特性，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域，尤其在病原體檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)展迅速。目前用于呼吸道病原體檢測(cè)的主要有CRISPR/Cas12和CRISPR/Cas13等系統(tǒng)。

CRISPR/Cas13檢測(cè)系統(tǒng)，張鋒等開發(fā)了一種基于CRISPR/Cas13的SHERLOCK技術(shù)，為SARS-CoV-2提供了快速準(zhǔn)確的診斷方法。通過使用合成的SARS-CoV-2的RNA片段，設(shè)計(jì)并檢測(cè)了2個(gè)可識(shí)別SARS CoV-2特征的sgRNA，激活Cas13酶活性，切割報(bào)告分子，產(chǎn)生信號(hào) 。該技術(shù)最后需要將試紙條浸入反應(yīng)體系中，通過辨識(shí)條帶位置的不同來確認(rèn)是否感染SARS-CoV-2。

諾貝爾獎(jiǎng)獲得者Doudna等報(bào)道了一種CRISPR/Cas13a和手機(jī)直接檢測(cè)新冠病毒的RNA的方法 ，這是一種簡便且便攜的檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)從采樣到檢測(cè)的一體化。該裝置通用小型精簡的手機(jī)攝像頭進(jìn)行熒光測(cè)試。此外，因?yàn)槭謾C(jī)攝像頭具有高靈敏度、強(qiáng)連接性以及GPS和數(shù)據(jù)處理功能，所以這是一種可以應(yīng)用到資源匱乏地區(qū)的實(shí)用工具，有助于即時(shí)檢測(cè) 。

在CRISPR/Cas12檢測(cè)系統(tǒng)，美國加州大學(xué)研究人員開發(fā)了一種基于CRISPR/Cas12的快速檢測(cè)SARS-CoV-2的方法，稱為DETECTR （DNA endonuclease targeted CRISPR trans reporter） 的病毒傳感器。該方法具有與qRT-PCR相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確性，具有無需加熱循環(huán)、快速、單核苷酸靶標(biāo)特異性、無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備等優(yōu)勢(shì)  。 

此外，復(fù)旦大學(xué)牽頭的研究團(tuán)隊(duì)報(bào)道了一種基于CRISPR/Cas12的“多相復(fù)式非連續(xù)生產(chǎn)法”用于檢測(cè)SARS-CoV-2，俗稱“一鍋法” （opv CRISPR） ，是將逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù) （RT-LAMP） 及Cas12a剪切整合到一個(gè)反應(yīng)體系中完成檢測(cè) 。在SARS-CoV-2潛在感染的臨床樣本的檢測(cè)中，用opv CRISPR方法得到的結(jié)果和中國疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn)的RT-PCR的檢測(cè)結(jié)果達(dá)到100%的一致。這種“一鍋法”的形式，可以完全避免擴(kuò)增子的污染，實(shí)驗(yàn)操作步驟也被大大簡化，具有很好的臨床應(yīng)用前景  。

雖然基于CRISPR/Cas的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展迅速，但是仍然存在一些障礙和局限性需要研究解決，首先受到PAM序列特點(diǎn)的影響，sg RNA設(shè)計(jì)的靈活性有限，設(shè)計(jì)相對(duì)復(fù)雜；其次CRISPR/Cas 系統(tǒng)識(shí)別目標(biāo)位點(diǎn)以外的其他位點(diǎn)，產(chǎn)生“脫靶”效應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽性；因此，除了對(duì)現(xiàn)有CRISPR/Cas的診斷技術(shù)繼續(xù)優(yōu)化外，仍需發(fā)現(xiàn)、發(fā)展新型的CRISPR/Cas診斷系統(tǒng)，或與其他方法進(jìn)行整合以提高應(yīng)用的普適性，從而確保其具有良好的臨床適用性。